胰蛋白酶细胞培养液血细胞计数器计数法

实验方法原理血细胞计数器含有 2 个室，每个室充满并盖上盖玻片后总体积为 9x10-3 ml, 每室有 9 个大方格，因此盖上盖玻片后每个大方格的容积为 0.1 mm3 或 1.0x10-4 ml，对计数来讲，9 个大方格再进行分隔没有必要，可以忽略不计。

实验材料细胞样本

试剂、试剂盒胰蛋白酶 细胞培养液

仪器、耗材毛细吸管 载玻片 盖玻片

实验步骤1、按前述方案(见「胰蛋白酶处理分离细胞」)用胰蛋白酶处理细胞，细胞重悬于细胞培养液中。

2、用毛细吸管吸出欲计数的两份细胞标本。依靠毛吸管作用细胞悬液进人覆盖盖玻片的计数器。

3、对细胞计数器两边的 9 个大方格中各 5 个格即共 10 个格进行计数。

4、合汁 10 个大方格的细胞数(每室 5 个，共 2 室)，算出 1x10-3 ml 中的细胞数(每个大方格 1x10-4 mlx10 个大方格=10-3 ml 容积)。细胞总数乘以 1000 即得每毫升计数细胞悬液的细胞数。

5、计数完毕后立即用双蒸水清洗计数器和盖玻片，然后用 70% 乙醇清洗，用擦镜纸擦干。

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注意事项应用计数器计数出现的某些错误的原因：

• 取自原始细胞悬液的不均匀取样。原始细胞悬液应搅动混匀，在细胞计数过程中细胞不应沉淀至容器的底部。

• 计数器室内充填不够或过度填充。计数室的容积是基于盖玻片平稳地置于计数器边缘上，过度充填增加被计数的体积。

• 细胞团、细胞团不易通过毛吸作用进人计数室，故被排斥在计数之外进人计数室的小细胞团较难精确计数，甲个分散状细胞悬液对精确计数来讲是至关重要的，细胞应彻底混合达到均匀化。

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